鬼吹灯之圣泉寻踪金盆洗手后的三人分开来，Shirley杨回了美国，进入了自然博物馆，成为了一个普通的工作人员。可某日她却突然消失了。从国内和日本赶来的胡八一和王胖子在遇见了Shirley杨以后，经过一番美国的华人街乱斗，卷入了一场寻印事故中。后来自然博物馆发生了火烧事故，Shirley杨也神秘失踪了，胡八一在经过一番调查，发现Shirley杨是跟踪行凶人前往了南美，目标直指印加人传说中的青春泉宝藏。在追踪的过程中，他们见识了南美雨林诸多奇异的生物，以及当地的土著人种。最为奇怪的有二，一是在南美的丛林里世世代代生活的土著，竟然会认识王胖子身上带的"摸金符"；二是Shirley杨竟然在他们遇险的时候惊现了一下，但是却没有搭救他们，反而落井下石。终于他们一路追赶，追踪到了传说中印加人的圣地青春泉，最终的幕后黑手竟然是一个会蛊术的干瘪老头，看上去像是粽子一般的人物......最后的真相到底是什么？